¿Cuál es la eficacia de los ensayos de RT-PCR para la detección del SARS-CoV-2 en el semen humano?

El brote de la pandemia del síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS-CoV-2) ha puesto de manifiesto la preocupación que suscitan las muestras de semen para su criobanqueo.

El SARS-CoV-2 utiliza el receptor del huésped de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) y cofactores celulares como la TMPRSS2 para entrar en las células diana. La viremia transitoria durante la infección por el SARS-CoV-2 y la expresión de TMPRSS2 y ACE2 en los testículos y otras glándulas accesorias pueden conducir a la diseminación del SARS-CoV-2 en el tracto reproductor masculino.

Antecedentes

Aunque la replicación del SRAS-CoV-2 no se produce mayoritariamente en el sistema reproductor masculino, algunas células masculinas específicas pueden actuar como reservorios virales tras una infección sistémica por el SRAS-CoV-2.

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Impacto de la infección por SARS-CoV-2 en la calidad del semen humano

Además, las muestras de semen podrían contaminarse con el SRAS-CoV-2 durante la recogida de esperma. La posibilidad de que el SRAS-CoV-2 esté presente en las muestras de semen criopreservadas es motivo de preocupación para los pacientes que se someten a tratamiento con tecnología de reproducción asistida (TRA) y preservación de la fertilidad.

Anteriormente, cuatro estudios habían indicado la presencia del genoma del SARS-CoV-2 en muestras de semen. Tres de estos estudios utilizaron ensayos comerciales de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) para evaluar las muestras de semen, mientras que uno no describía el mecanismo de detección del virus.

Sin embargo, estos estudios se referían a una población pequeña y no incluían un método validado para detectar el SRAS-CoV-2 en muestras de semen. Además, la mayoría de los estudios utilizaron ensayos comerciales de RT-PCR aprobados sólo para muestras respiratorias y se dirigieron a sólo dos o tres genes virales.

Tres estudios utilizaron una PCR digital en gotas (dd-PCR) para la detección a buen nivel del genoma del SARS-CoV-2. Sin embargo, el tipo de muestra no era en su mayoría semen para este proceso también. En estos estudios debe confirmarse el límite de detección (LOD) para las muestras de semen.

Otro estudio utilizó una "prueba SpermCOVID" para la detección del genoma del SARS-CoV-2 en muestras respiratorias pero no en muestras de semen.

Un nuevo estudio publicado en la revistaReproductive Biomedicine Online tenía como objetivo desarrollar un protocolo estandarizado para la detección del ARN del SARS-CoV-2 en fracciones de semen utilizadas para la terapia antirretroviral. Se trataba de un ensayo de RT-PCR de alto rendimiento que utilizaba muestras de espermatozoides y líquido seminal criopreservado para la detección del ARN del SARS-CoV-2. Además, también se determinó la eficacia del método según las diferentes características del semen.

Acerca del estudio

El estudio consistió en la recogida de muestras de semen de pacientes que se sometieron a análisis rutinarios de semen por infertilidad, independientemente de los criterios clínicos, el índice de masa corporal o la edad, entre julio de 2020 y marzo de 2021. Ninguno de los pacientes declaró tener fiebre o cualquier otro síntoma de SARS-CoV-2. También declararon no haber estado expuestos a nadie con síntomas de SARS-CoV-2. A continuación, se llevaron a cabo los análisis convencionales de semen, la detección de leucocitos y la evaluación o morfología, seguidos de la preparación de las muestras.

Las muestras normozoospérmicas se descongelaron a 4°C y se agruparon para las pruebas analíticas. Se extrajo el ARN de 160 µl de cada muestra, seguido de la amplificación del genoma del SARS-CoV-2 y la validación analítica del ensayo de RT-PCR del SARS-CoV-2. Se analizó el impacto de la calidad del semen en la eficacia de la RT-PCR. Por último, se realizaron ensayos de precisión y LOD y límite de cuantificación (LOQ) para el ensayo de RT-PCR del SARS-CoV-2.

Resultados

Los resultados informaron de que los ensayos de precisión cumplían los requisitos esperados para los tipos de semen con alta concentración de ARN del SARS-CoV-2, para las dianas virales N y ORF1ab, y para los tipos de semen con baja concentración de ARN del SARS-CoV-2. Además, se informó de que el gen S era la diana viral menos sensible del ensayo, mientras que el gen N era la diana más sensible.

Se observó que los medios crioprotectores y las características del semen no afectaban a la eficacia del método de detección. Se informó de que el LD era de 0,33 copias del genoma del SARS-CoV-2/µl de la muestra para el líquido seminal y de 0,23 copias del genoma del SARSCoV-2/µl para los espermatozoides. Por último, se dijo que el LOQ era de una copia del genoma viral/µl de la muestra.

Por lo tanto, este estudio pudo determinar la presencia del ARN del SARS-CoV-2 en los espermatozoides criopreservados y en el líquido seminal. El método fue eficaz independientemente de las características del esperma y del tipo de semen. Así, este método puede garantizar la seguridad de los donantes de semen y de los pacientes que se benefician de las técnicas de preservación de la fertilidad durante la pandemia de SARS-CoV-2.